流通池法——阿霉素脂質體的溶出研究

流通池法（流池法）一直被認為是研究微粒和脂質體溶出行為的方法，有不少文獻對此進行了深入的研究和探討。所以，今天跟大家分享Wenmin Yuan等人利用流通池法，研究復合阿霉素（DOX）脂質體制劑溶出的案例。

本研究指出，流通池法是一種可靠的復雜脂質體產品溶出分析方法，該方法受到操作誤差的影響較小，并且可以在不同脂質體制造商之間輕松地進行方法轉移。

1. 材料和方法

透析管的分子量截止值（MWCO）：300 kDa。

DOX脂質體樣品量：將0.4ml的DOX脂質體制劑（2mg/ml）與1.2ml溶出介質混合。

溶出介質：100mM NH4HCO3，75mM 2-(N-嗎啉)乙磺酸（MES）和5% w/v 羥丙基環糊精（HP-CD），5% w/v蔗糖，0.02% w/v NaN3（pH6）。

溶出介質體積：78.4ml。

溫度：37℃、45℃和 55℃。

流速：16 mL/min。

模式：閉環。

紫外檢測波長：480 nm。

2. 結果

2.1 溫度對溶出度的影響

如下圖所示，在55℃、45℃和37℃下，7小時內DOX的累積溶出率分別為91.0% ±1.6%、42.4% ±0.6%和4.5% ±0.1%。

隨著溫度的升高，溶出量顯著增加。研究選擇45°C作為后續測試溫度，是因為在此溫度條件下，樣品在24小時內幾乎*溶出（95.3%±1.2%），但溶出速率不會太快，可以區分制劑之間的差異。

2.2 日常變異性

使用相同的樣品制劑在三個不同日期進行溶出試驗，分析日常變異性。實驗結果表明該方法的日常變異是可控的。在溶出曲線上沒有觀察到顯著差異（在第1天和第2天，f2=73.4；在第1天和第3天，f2=63.4；在第2天和第3天，f2=81.0）。

2.3 脂質體組成及制備方法對溶出的影響

將市售的Doxil®作為參比制劑。處方中使用HSPC替代POPC，樣品可在10小時內迅速、*地溶出。脂質體處方中其他成分與Doxil®相同，但制劑的物理化學性質略有不同。

研究中制備的所有制劑的溶出率均低于市售Doxil®。在制備的脂質體中，與低壓均質（L-DOXp）相比，高壓均質（H-DOX）制備的脂質體具有更快的溶出率。由于H-DOX制劑的平均粒徑更小，粒徑分布更廣，這可能是DOX溶出速度加快的原因。

脂質體擠出前制備多層脂質體（MLV）的方法對DOX的溶出也有影響。在硫酸銨水溶液（L-DOXp）中注入脂質溶液制備MLV時，DOX的溶出比在水溶液（L-DOXi）中高壓注射脂質溶液制備MLV時慢。

3. 討論

本研究建立的流通池測定法的主要局限性在于：測試條件本身決定了脂質體溶出結果。實驗溫度對DOX溶出率有顯著影響，終選定的流通池法參數與生理條件相差甚遠。因此，該方法可主要用于區分阿霉素脂質體制劑之間的相對差異，而不是定義體內相關性。

流通池法分析條件的主要優化標準是在12小時內看到超過80%的藥物從Doxil®中溶出，以便能夠在24小時內鑒別出具有更快或更慢溶出行為的脂質體制劑。

研究還發現，成分相同但采用不同方法制備的制劑，具有稍微不同的物理化學性質的制劑在體外可表現出非常不同的溶出。

4. 結論

本研究對流通池法的參數進行了優化，以適用于不同工藝制備的阿霉素脂質體脂質體體外溶出測試。已建立的流通池法可用于區分普通脂質體和新型阿霉素脂質體之間的可能差異，為設計更好的制劑提供有用的反饋，并有望可以將這些制劑的體外溶出行為與體內藥代動力學結果進行聯系。

原文：Developmentof a Flow-Through USP-4 Apparatus Drug Release Assay to Evaluate Doxorubicin Liposomes, Wenmin Yuan等, The AAPS Journal.

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